
核酸外切酶 III(E. coli)
引加生物的核酸外切酶III(Exonuclease III)來源于大腸桿菌的Exo III基因,并在大腸桿菌中表達并分離純化得到。該酶能作用于雙鏈DNA,沿3′-OH 末端逐步釋放5'-單磷酸核苷酸,產生ssDNA片段。每次酶與底物結合催化時,只有少量核苷酸被去除,從而在DNA分子群內產生漸進缺失。此外,該酶對ssDNA、硫代磷酸酯連接的核苷酸無活性。
盡管該酶也可作用于雙鏈DNA的切刻以產生單鏈缺口,但其最適底物是平末端的dsDNA或3′ 末端凹陷的dsDNA。該酶無法切割3′ 突出末端;抗切割程度隨突出末端的長度而變化,四堿基或更長的突出末端則完全不能被切割。
該酶的活性部分依賴于DNA的螺旋結構,并表現出序列依賴性(C>A=T>G)。溫度、鹽濃度和酶與DNA的比例對酶活性影響很大,需要根據特定應用調整反應條件。
Exo III還具有以下三種酶活性:
3'-磷酸酶活性:切除3'-末端的磷酸基團,產生3'-OH基團;
RNase H活性:外切核酸酶活性,降解RNA-DNA雜合體中的RNA鏈;
AP-內切核酸酶活性:切割脫嘌呤或脫嘧啶位點(AP位點)的磷酸二酯鍵,產生5'-端無堿基的脫氧核糖5'-磷酸殘基。
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詳細介紹
應用
(1) 非定向巢式缺失
(2) 定點突變
(3) 鏈特異性探針制備
(4) 制備用于雙脫氧測序的單鏈底物
優勢
(1) 無其他內切酶或外切酶污染。
信息
(1) 存放溫度:-20℃
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
核酸外切酶III(E. coli) | YJ-O-516-2.5 | 2.5KU |
YJ-O-516-5 | 5KU | |
YJ-O-516-25 | 25KU |
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